Kontrollierte Hybridomazellkultur zur Produktion von monoklonalen Antikörpern (mAb) im Laborbioreaktor LAMBDA MINIFOR.
Maus-Hybridoma-Zellen im Laborbioreaktor LAMBDA MINIFOR
In der jüngst publizierten Studie von CIGB Kuba wurden Maus-Hybridoma-Zellen in einem proteinfreien Zellmedium (PFM) für die Antikörperproduktion eingesetzt. Hierzu wurden im Laborbioreaktor LAMBDA MINIFOR sowohl Fed-Batch-Prozesse als auch kontinuierliche Zellkulturen erfolgreich kontrolliert gefahren.
Abbildung 1: Referenz Valdés R, Aragón H, González M, Hernández D, Geada D, Goitizolo D et al. Mouse hybridoma cell culture in a protein-free medium using a bio-mimicking fish-tail disc stirred bioreactor. BioProcess J, 2017; 16(1): 51–64. doi.org/10.12665/J161.Valdes
Der LAMBDA MINIFOR Laborbioreaktor mit dem 7L Reaktorgefäss (Abbildung 1) wurde mit CB.Hep-1-Hybridoma inokuliert. Die für die Zellkultur wichtigen Parameter wie Temperatur, Mischung, Belüftung, pO2 und pH wurden vollautomatisch mit dem LAMBDA MINIFOR Laborbioreaktor und der Automationssoftware SIAM gemessen und geregelt.
Die in der Studie erhaltenen Ergebnisse zeigen
- eine kumulative CB.Hep-1 mAb-Produktion von 1.77 g während 15 Tagen,
- die höchste Zellkonzentration von 2.45 × 106 lebende Zellen / ml,
- eine maximale Zelllebensfähigkeit von 86 %,
- die exponentielle Wachstumsrate von 0.0156 / h und Zellpopulationsverdoppelungszeit von 44 Stunden.
Die Reinheit des CB.Hep-1 mAb, erhalten aus dem Überstand der Zellkultur und beurteilt durch eine SDS-PAGE-Analyse, betrug 99,5 %.
Wie werden die Hybridoma Zellkulturen optimal im Laborbioreaktor kultiviert?
Hybridoma Zellkulturen werden im Laborbioreaktor optimal kultiviert,
- indem das vollautomatische Gasgemisch die optimalen physiologischen Bedingungen wie Belüftung und pH für die Zellkulturen gewährleistet,
- das effiziente und zugleich schonende Mischsystem für scherkraftsensible Zellen den Sauerstoffeintrag und Stoffaustausch gewährleistet und
- der Laborbioreaktor mit dem LAMBDA EASY STERILITY Konzept für Langzeitversuche ausgestattet ist.
Vollautomatisches Gasmischung für die beste Parameterkontrolle der Zellkulturen
Das LAMBDA MINI-4-GAS Gasmischmodul ermöglicht die vollautomatische Gasmischung für Zellkulturen:
- Luft und O2 für die automatische Sauerstoffanreicherung anhand des pO2 Sollwerts
- CO2 für die automatische pH Regelung
- N2 als Konstante oder Füllgas
Jedes Einzelgas wird mit einem präzisen, digital ablesbaren LAMBDA MASSFLOW geregelt. Sämtliche Werte sind auf dem PC visualisierbar und speicherbar.
Abbildung 2: LAMBDA MINI-4-GAS besteht aus einem thermischen LAMBDA MASSFLOW für jedes Einzelgases und der PC-Software zur Ansteuerung und Berechnung der Durchsätze anhand der Parameter für die Zellkultur.
Das Gasmischsystem LAMBDA MINI-4-GAS unterstützt die optimalen physiologischen Bedingungen für Hybridoma Zellkulturen unter Verwendung moderner Kontrollstrategien.
Scherkraftfreies Mischsystem für Zellkulturen: LAMBDA FiSH-TAIL
Wichtig für eine hohe Zelllebensfähigkeit ist eine möglichst scherkraftfreie Mischung des Kulturmediums. LAMBDA FiSH-TAIL ist das effiziente und scherkraftfreie Mischsystem für Zellkulturen. LAMBDA FiSH-TAIL ist in jedem MINIFOR Laborbioreaktor zusammen mit dem Virbromischer implementiert:
- Keine hydrodynamische Schubspannung führt zu einer höheren Zellviabilität
(sehr vorteilhaft für Stammzellen, HeLa, HEK-293, CHO und andere Säugetierzelllinien) - Effizienter Sauerstoffeintrag und Stoffaustausch
Die Mischfrequenz und die Anzahl der Mischplatten kann jederzeit zwischen 0 und 20 Hz (entsprechen 0 - 1200 rpm) in Schritten von 0.1 Hz (6 rpm) an das Volumen und Stadium der Zellkulturen angepasst werden.
Einfaches Sterilhandling während der Antikörperproduktion im Langzeitversuch
Die Langzeitversuche mit kostspieligen und kontaminationsanfälligen Säugetierzellkulturen müssen bestens gegen Kontaminationen geschützt werden. Die anwenderfreundliche Konstruktion des LAMBDA MINIFOR Laborbioreaktors gewährt deshalb ein ideales und einfaches Sterilhandling während Langzeitversuchen wie der Antikörperproduktion, das sogenannte LAMBDA EASY STERILITY System:
Abbildung 3: Die einzigartige Konstruktion des LAMBDA MINIFOR Laborbioreaktors erlaubt ein einfaches Sterilhandling während der Wachstums- und Produktionsphase der Zellkulturen sowie bei der Ernte des Überstandes, der die Antikörper enthält. Das Reaktorgefäss mit allen Schlauchanschlüssen und Sonden ist einfach autoklavierbar.
Die LAMBDA Mehrfachdichtungen garantieren einen einfach zu handhabenden und perfekten Verschluss für Sonden und Septum (Animpfung der Hybridoma Zellkultur) wie auch den Anschluss von Gas- und Flüssigkeitslinien am Laborbioreaktor.
Die zuverlässigen LAMBDA Schlauchpumpen für Feed und Abernte sind äusserst schlauchschonend und eigens für zuverlässige und genaue Langzeiteinsätze in der Zellkulturtechnik entwickelt worden.
Weitere Einzelheiten zu den Laborbioreaktoren für die Antikörperproduktion mit Hybridomazellen finden Sie auf www.lambda-instruments.com/de/bioreaktor-laborfermenter/ und https://bioreactor.ch/9-punkte-bioreaktor-tierische-zellen/.
Schlüsselwörter: Hybridoma Zellkulturen; proteinfreien Zellmedium (PFM); Produktion; monoklonale Antikörper; mAb; Laborbioreaktor; scherkraftfreie Mischung; Zelllebensfähigkeit; Gasmischung für Zellkulturen;