Culture contrôlée d'hybridomes pour la production d'anticorps monoclonaux (mAb) en bioréacteur de paillasse LAMBDA MINIFOR.
Culture d'hybridomes de souris dans le bioréacteur de paillasse LAMBDA MINIFOR
Lors d'une récente étude réalisée par le centre CIGB de Cuba, le bioréacteur de paillasse LAMBDA MINIFOR a été utilisé pour la culture d'hybridomes de souris dans un milieu sans protéine (PFM) pour la production d'anticorps monoclonaux en procédés fed-batch et continus.
Figure 1: Réference Valdés R, Aragón H, González M, Hernández D, Geada D, Goitizolo D et al. Mouse hybridoma cell culture in a protein-free medium using a bio-mimicking fish-tail disc stirred bioreactor. BioProcess J, 2017; 16(1): 51–64. doi.org/10.12665/J161.Valdes
Le bioréacteur de paillasse LAMBDA MINIFOR équipé d'une cuve de 7 L (Figure 1) a été inoculé avec des hybridomes CB.Hep-1 et tous les paramètres importants tels que la température, l'agitation, la concentration en oxygène dissout (DO) et le pH sont régulés par l'unité de commande LAMBDA MINIFOR ou le logiciel de fermentation SIAM.
Les résultats de l'étude montrent que la production cumulée de cellules CB.Hep-1 mAb atteint 1.77 g en 15 jours, la concentration cellulaire maximale atteint une valeur de 2.45 × 106 cellules viables/ml, la viabilité maximale est de of 86 %, la vitesse de croissance spécifique est de 0.0156 /h ce qui correspond à un temps de doublement de 44 h.
La pureté des cellules CB.Hep-1 mAb déterminée par analyse SDS-PAGE en condition réductrice est de 99.5 %.
Module de mélange de gaz basé sur les débitmètres massiques MASSFLOW pour la culture de cellules
Figure 2: Module de mélange de gaz automatique LAMBDA MINI-4-GAS composé de différents régulateurs de débit LAMBDA MASSFLOW pour la culture de cellules de mammifères.
Le module de mélange de gaz LAMBDA MINI-4-GAS permet un contrôle individuel de l'addition de différents gaz (Air, O2, CO2, N2) pour les cultures de cellules. Ce module permet de maintenir les conditions physiologiques optimales pour les cultures de cellules de mammifères et cellules souches selon des stratégies de commandes modernes.
Par exemple: la station LAMBDA MINI-4-GAS permet d'effectuer une régulation du pH de la culture par addition contrôlée de CO2 gazeux.
Agitation biomimétique sans contrainte de cisaillement de type LAMBDA FiSH-TAIL
L'agitateur unique biomimétique de type LAMBDA FiSH-TAIL permet une agitation efficace sans contrainte de cisaillement pour les cellules:
- mélange efficace mais doux
- pas de contrainte de cisaillement ce qui améliore la viabilité des cellules (très bénéfique pour les cellules souches, HeLa, HEK-293, CHO et autres lignées de cellules de mammifères)
- bonne oxygénation et transfert de gaz depuis le milieu optimal
La fréquence d'agitation peut varier de 0 à 20 Hz (ce qui correspond à environ une gamme de 0 à 1200 rpm) par pas de 0.1 Hz (6 rpm).
Le nombre de disques d'agitation LAMBDA FiSH-TAIL et leur type peut varier selon le type de lignée cellulaire et le volume de milieu. Les disques d'agitation restent efficaces même avec de très faibles volumes de milieu liquide.
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Maintien des conditions aseptiques dans le bioréacteur de paillasse durant les longues cultures de cellules en continu
La conception des différents éléments du bioréacteur de paillasse LAMBDA MINIFOR permet d'assurer le maintien des conditions de stérilité très facilement pour les procédés batch, fed-batch et continus.
Figure 3: Les différents éléments du bioréacteur de paillasse LAMBDA MINIFOR ont été étudiés pour assurer une parfaite stérilité durant les longs procédés de culture.
Le milieu dans le bioréacteur de paillasse est entièrement isolé de l'extérieur grâce à des joints multiples pour les sondes, des septums (pour l'ensemencement aseptique) et des lignes spécifiques pour les gaz et liquides.
LAMBDA propose des pompes péristaltiques fiables autorisant des débits reproductibles et stables sans risque de rupture du tuyau durant de longues semaines.
Vous trouverez d'autres avantages du bioréacteur de paillasse LAMBDA MINIFOR aux pages www.lambda-instruments.com/fermenter-bioreactor/ et https://bioreactor.ch/fr/acessoires-modules-fermenteur-laboratoire/.
Mots-clés: culture de cellules d'hybridomes; milieu sans protéine; PFM; production d'anticorps monoclonaux; mAb; bioréacteur de paillasse; LAMBDA MINIFOR; agitation; LAMBDA FiSH-TAIL; viabilité cellulaire; station de mélange 4 gaz; LAMBDA MINI-4-GAS;